科学家建立用于抗原表位精细作图的肽生物合成法

2017-10-10 08:43 来源:科学网 
2017-10-10 08:43:18来源:科学网作者:责任编辑:赵清建

  科学网10月9日上海讯(记者黄辛)上海市计划生育科学研究所徐万祥研究员和复旦大学生命科学院谢毅课题组合作,在抗原表位作图和抗体识别精细表位鉴定的免疫学领域建立了肽生物合成法。附带详细操作程序的方法学相关研究成果,日前发表于《公共科学图书馆-综合》期刊。

  新改良法仍使用截短的谷胱甘肽巯基转移酶(GST188)作为短肽的基因工程表达蛋白载体,但通过在pXXGST-1质粒的克隆区插入一病毒基因,既保留了原方法的主要特点,如相对肽化学合成的编码DNA片段合成费用低廉、短肽重组克隆构建简便、和表达的短肽无需纯化就能用于化学发光试剂显色的免疫印迹鉴定,也形成了二个新优点:可回收双酶切pXXGST-3质粒载体,通过排除不完全酶切的载体而确保目的重组克隆构建成功率;由于不再需要设置对照蛋白,通过蛋白凝胶电泳筛选重组克隆更方便可靠。

  据悉,研究成果表明此法可实现用目前其他任一技术都无法企及的目标,即能鉴定出是每一非构象型抗体典型标签的表位最小基序(最短3 肽最长8肽),并显示出这一鉴定的意义和必要性。例如:它有助于解码任一靶蛋白抗原IgG-表位组;有助于避免时下常见两个不同术语的混用,如将未经过精细表位鉴定的‘抗原性肽’,甚至将37肽称之为‘表位’或‘表位肽’;也有助于国家相关部门率先制定将抗体识别的精细肽基序特征作为非构象型抗体药物的审批新标准,因为执行这一指标已有切实可行的方法;尤其对交叉反应性单克隆抗体而言,还可能因此扩大其在同源蛋白中应用范围。

  众所周知,重大疾病肽诊断抗原试剂和预防性合成肽疫苗的研制都依赖于靶蛋白上线性表位的发现。因此,这一从2004年起意、创建、改良到目前最终优化的GST188-生物合成肽法,为解码感兴趣靶蛋白的表位组并发现用于研制预防性重组多表位肽疫苗的更多功能性抗体中和表位,提供了操作简便经济且可靠的新工具。

[责任编辑:赵清建]

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